Bradford蛋白浓度测定试剂盒

产品货号：

JN0181

中文名称：

Bradford蛋白浓度测定试剂盒

英文名称：

Bradford Protein Assay Kit

产品规格：

1000T

发货周期：

1～3天

产品价格：

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本试剂盒是根据最常用的两种蛋白浓度检测方法之一Bradford法研制而成，实现蛋白浓度测定的快速、稳定和高灵敏度。

产品特点

简单快速：只需要一种反应试剂，检测速度极快，10～20个样品只需不足10分钟即可完成。
灵敏度高：检测浓度下限达到25μg/μL，最小检测蛋白量达到0.5μg，待测样品体积为1～20μL。
测量范围广：50～1000μg/μL浓度内有较好的线性关系。
抗干扰能力强：不受还原剂（如DTT，巯基乙醇）的影响。而且与一系列干扰Lowry，BCA反应的还原剂（如DTT，巯基乙醇）相容。样品中巯基乙醇的浓度可高至1M，二硫苏糖醇的浓度可高至5mM。

Bradford法对于去污剂比较敏感，需确保SDS低于0.1%，Triton X-100低于0.1%，Tween 20,60,80低于0.06%。含去垢剂的样品可使用BCA蛋白浓度测定试剂盒。
Bradford染色液中考马斯亮蓝易聚集成团，使用前请颠倒6～8次并竖直抓住瓶口做水平圈动作，旋转瓶中液体，充分混匀，但不可以上下振荡混匀。
低温会降低Bradford染色液的敏感度，因此每次使用前需将Bradford染色液恢复至室温。倒出每次需要的Bradford染色液，原瓶放回冰箱，减少复温时间。
蛋白标准品请在全部溶解后先混匀，再稀释成一系列不同浓度。标准品曲线配制时，吸量不准确或者加样枪不精确会造成标准曲线相关系数减小，可根据需要使用倍比梯度稀释的方法，或使用精确度高的加样枪。
由于Bradford法在蛋白浓度增高到一定时候，颜色反应并不成比例增加，因此得到的标准曲线只是在一定范围内可以近似看成直线，每次应按照实际测得的标准曲线计算出相对精确的蛋白浓度。所测蛋白质浓度应确保处于标准曲线线性范围内，否则测定结果将出现较大误差。每次测定蛋白样品时，应做新的标准曲线。

蛋白标准品溶液准备：
取适量2mg/mL蛋白标准品（BSA Standard），稀释至0.5mg/mL。例如，取20μL 2mg/mL蛋白标准品，加入60μL稀释液，配制成0.5mg/mL蛋白标准品。蛋白样品在什么溶液中，标准品也宜用什么溶液稀释。为了简便起见，也可0.9%NaCl或PBS稀释标准品。稀释后的蛋白标准品也可-20℃长期保存。
标准曲线制备和样品蛋白测定：
- 标准曲线制备：按下表在96孔板的样品孔中加入各种试剂，加标准品稀释液补足至20μL。然后加入200μL Bradford染色液（Bradford Reagent），室温放置3～5分钟。
  编号 1 2 3 4 5 6 7 8
  0.5mg/mL蛋白标准品(μL) 0 1 2 4 8 12 16 20
  标准品稀释液(μL) 20 19 18 16 12 8 4 0
  Bradford染色液 200μL
- 样品蛋白测定：在96孔板的样品孔中加适当体
  积的样品，加标准品稀释液到20μL。然后加入200μL Bradford染色液，室温放置3～5分钟。
用酶标仪测定A595，或560～610nm之间的其它波长的吸光度。然后根据标准曲线计算出样品的蛋白浓度。

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